原位定量检测蛋白质怎样的?
质谱成像技术(IMS):直接对组织切片进行质谱分析,无需预先标记抗体,即可在原位定量蛋白质并生成空间分布图谱。该技术能够保留蛋白质的原始空间信息,适用于肿瘤微环境或发育生物学中的蛋白质动态研究。其他技术深度视觉蛋白质组学(DVP)通过激光解剖复杂样品,将单个细胞解离后进行质谱分析,同时保留其空间背景信息以构建蛋白质图谱。
该研究证明了基于有限蛋白水解质谱(LiP-MS)和蛋白质整体结构方法可检测出蛋白质的多种原位功能事件,其强大的读数功能可检测出生理和病理表型下的分子事件。研究背景 生物学过程由分子间相互作用和化学修饰调控,这些调控通常不影响蛋白表达水平,因此在传统的蛋白质组学筛选中难以被检测到。
例如,IHC和IF技术适用于可视化蛋白质的空间分布和表达水平;IMS技术能够在原位对组织中的蛋白质进行定量分析和成像;而质谱与激光显微切割技术的结合则能够实现对特定空间位置组织微环境的系统分析。因此,在选择合适的技术时,需要综合考虑研究对象、研究问题以及实验条件等因素。
此外,该技术通过抗体偶联核酸的原位测序对蛋白质进行原位检测,在PCV2和CSFV病毒共感染的细胞中同时检测到了干扰素γ、Pol II、猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白这四种蛋白质,并通过同时检测蛋白质和mRNA揭示了8种细胞因子/趋化因子基因在PCV2和CSFV感染后的动态表达。
原位杂交:使用标记的DNA或RNA探针与组织切片中的RNA杂交,用于检测基因在特定组织或细胞中的表达位置。免疫组化:利用特异性抗体与组织切片中的蛋白质结合,通过显色反应检测蛋白质的存在和分布。定量PCR:在提取的组织或细胞RNA基础上,进行定量PCR分析,以精确测量特定RNA的表达水平。